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DO you know,细胞的群体倍增?

细胞群体倍增时间是指细胞在培养条件下生长时其数目倍增所需的时间。在进行细胞相关研究时,时常需要研究生物细胞的倍增时间,以更好的制定实验计划。例如:MLE 12 (ATCC  CRL-2110)小鼠肺泡上皮细胞,群体倍增时间为7-9小时,建议传代比率为1:5-1:10。而MRC-5人胚肺细胞 (ATCC  CCL-171)凋亡前能进行42-46次倍增,所以应注意不能长期传代培养, 建议传代比率为1:2 - 1:5 。相比之下,传代仅仅是指子代细胞培养过程,即从培养容器分离细胞,然后以较低的密度接种,以便细胞继续增殖。因此,细胞代数只是针对细胞实际培养年龄的一个粗略估计。

细胞群体倍增时间一般通过人工绘制曲线来完成,这种方式准确度较高,但过程繁琐。而在许多场合下,不需要准确的测量细胞群体的倍增时间。采用MTT,MTS,CCK8等方法,可以使用OD值的读数计算细胞群体倍增时间。可参考以下MTT法检测细胞群体倍增时间。取对数生长的细胞,消化离心,制备成单细胞悬液,种板。种板选择适当的细胞接种浓度,细胞数太多敏感性降低,太少观察不到差异。接种后第4h(细胞贴壁后),24h,48h,72h,96h,120h后,每孔加入新鲜配制的MTT(5 mg/ml)20 µl,继续培养4 h后弃上清液,每孔加入DMSO 200 µl。振荡10 min使其充分溶解后,测定吸光度值(OD值),以空白处调零。在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,MTT 吸光度在0-0.7 范围内。根据细胞倍增时间公式,计算细胞倍增时间:TD=t×lg2/(lgNt-lgN0)(TD为细胞倍增时间,t为培养时间,Nt为培养t小时候OD值,N0为接种后OD值)。


中乔新舟 生物科技 细胞培养方法 原代细胞和细胞系的差别 生物技术 人主动脉内皮细胞 原代细胞


原代细胞指从机体取出后立即培养的细胞有人把培养的1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞原代细胞不仅广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究,还可应用于当今热门的生物医药产业药物筛选药物代谢和毒理研究、癌症药物的研究等。在血液、皮肤及肠道等组织中提取的干细胞始终保持着再生能力,骨骼肌等组织除了损伤等异常情况外再生能力超常,正常情况下自我更新能力较弱,而神经元组织(除嗅觉神经外)根本无再生能力。ScienCell实验室提供的原代细胞说明书中提到相应细胞的倍增数(population doublings),例如人脐静脉内皮细胞(Catalot.8000)、人主动脉平滑肌细胞Catalot.6110)人支气管上皮细胞Catalot.3210)等均为约15倍增;人主动脉内皮细胞Catalot.6100)、人雪旺细胞Catalot.1700)、人星形胶质细胞Catalot.1800)、人口腔角质细胞Catalot.2610)等均为约10次倍增;人脉络丛上皮细胞(Catalot.1310)、人心脏微血管内皮细胞Catalot.6000)均为约5次倍增;人海马趾神经元Catalot.1540)、人肝细胞Catalot.5200)等均不建议传代,不可长期培养。ScienCell实验室提示,使用的原代细胞在超过预期群体倍增时间的情况下进行实验可能会影响实验结果,建议尽早使用原代细胞进行实验,防止基因飘移的发生。实验室引进细胞之前,应详细了解细胞特性,熟读说明书,设计安排实验,防止不必要的资源浪费。


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