您是第 7985598 位 欢迎访问 中乔新舟官网 ! 全国免费电话:400-038-9959 我的购物车(0) 注 册 / 登 录
扫码关注公众号
您当前的位置:首页 > 知识库
知识库knowledge数量:49
当细胞遇到支原体....

支原体是1898年Nocard等发现的一种类似细菌但不具有细胞壁的原核微生物,能在无生命的人工培养基上生长繁殖,直径50-300nm,能通过细菌滤器。


      支原体在过去曾称之为类胸膜肺炎微生物(pleuropneumonia-like organism,PPLO),1967年正式命名为支原体。

     支原体(mycoplasma):又称霉形体,为目前发现的小而简单的原核生物,基因数量为480。支原体细胞中一个可见的细胞器是核糖体(支原体是原核细胞,原核细胞的细胞器只有核糖体)。

中乔新舟 生物科技 细胞培养方法 原代细胞和细胞系的差别 生物技术 支原体 支原体检测

 支原体结构也比较简单,多数呈球形,没有细胞壁,只有三层结构的细胞膜,故具有较大的可变性。

支原体这种微小的微生物,是细胞培养中令人头疼的大问题。支原体污染可能来自培养基、血清或实验操作者,会影响细胞生长率、细胞形态、基因表达、细胞代谢和细胞活力。支原体感染不易察觉,因此对培养细胞定期进行支原体检测就非常重要。污染实验室培养细胞的支原体主要有八种,但还没有哪种检测方法能够单枪匹马把这八种支原体都检测出来。

      支原体非常顽强,通常用于细胞培养的绝大多数抗生素都对其无效。例如青霉素主要作用于细菌细胞壁,但支原体没有细胞壁因此就不受影响。无懈可击的细胞培养技术始终是预防支原体感染的很好方式,另外及时找出受到支原体感染的培养物也很重要,这样才能在感染扩散前快速采取有效措施。

 

几种在培养细胞中检测支原体的常用方法。


01  分离培养法

中乔新舟 生物科技 细胞培养方法 原代细胞和细胞系的差别 生物技术 支原体 支原体检测


分离培养法是支原体检测的金标方法,其检测准确度高。这种方法是从可疑的细胞培养体系中取样,并接种到适宜支原体生长的琼脂平板上。如果样本中含有支原体,它们就会在这种琼脂平板上疯狂生长,形成明显可见的特征性菌落。分离培养法基本不会出现假阴性结果,因此被誉为支原体检测金标准。不过分离培养法也存在两个弊端,一是检测时间太长,支原体要长出明显克隆至少需要4周时间。二是尽管可以检测绝大多数支原体种类,分离培养法也有力所不及的时候,例如支原体M. hyorhinis。

 

如果你实在不想等这么久,或者希望在分离培养法的等待过程中先拿到初步结果,你可以试一试DNA、PCR或酶学检测方法。不过需要注意的是,上述检测方法都不能单独检出所有类型的支原体,而且灵敏度也没有分离培养法高,所以要结合使用两种方法以获得可靠的检测结果。

 

02  DNA检测法

中乔新舟 生物科技 细胞培养方法 原代细胞和细胞系的差别 生物技术 支原体 支原体检测


DNA检测需要将可疑样品与指示细胞共同培养,因此一般需要几天时间。DNA检测所用的指示细胞通常是细胞质区域较大的Vero细胞,如果原样本中含有支原体,那么当细胞DNA被荧光染料(如Hoechst染料)染色时,就可以在指示细胞的核周围观察到荧光斑点或荧光颗粒。分离培养法用来检测支原体M. hyorhinis菌株并不可靠,而DNA法可以准确的将其检测出来。

 

03  PCR

中乔新舟 生物科技 细胞培养方法 原代细胞和细胞系的差别 生物技术 支原体 支原体检测


PCR法也可以检测M. hyorhinis菌株,PCR法检测支原体只需几个小时,是快但也是不灵敏的支原体检测方法。该方法采用针对支原体DNA的引物用PCR检测可疑样本,其中PCR引物通常针对支原体的16S rRNA基因。在凝胶电泳过程中,支原体DNA会显示为特异性条带,以此指示支原体的存在。PCR法可以检测大多数支原体,但谨慎起见要同时使用另一种检测方法来进行验证。



04  酶学检测和ELISA

中乔新舟 生物科技 细胞培养方法 原代细胞和细胞系的差别 生物技术 支原体 支原体检测




公司简介 / Company profile
上海中乔新舟生物科技有限公司
Shanghai Zhong Qiao Xin Zhou Biotechnology Co.,Ltd.
           上海中乔新舟生物科技有限公司(官网:www.zqx...
联系我们 / Contact
电 话:021-56760357;021-56760351
邮 箱:sales@zqxzbio.com
邮 编:200439
地 址:上海市宝山区长江南路180号
Copyright © 2014 ZQXZBIO All rights reserved. 网站地图

沪公网安备 31011002001038号

技术支持:攸攸网络 沪ICP备14008091号