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LNCAP细胞处理小技巧!
简介:
LNcapcloneFGC,人前列腺癌细胞,1977年从一名患有前列腺癌的50岁男性的左锁骨上淋巴结转移中建立,该患者经确诊为前列腺癌转移;文献中描述细胞对雄激素敏感。

该细胞培养期间会遇到那些问题或者特殊需求呢?

1.生长速度缓慢。

2.培养一段时间发现聚团了怎么办?


3.使用的培养瓶是否需要特殊处理或者采用一些特殊的培养瓶呢?

想必这些是大家经常遇到的问题吧,那么下面我们就为大家一一解答这些疑问,处理大家经常遇到的问题吧。


该细胞自身生长速度是属于比较缓慢的一种类型,具体倍增时间大约在60多个小时左右,这些是我们实验人员难以干预的因素,另外该细胞在培养的时候会引起培养基ph值明显变化,因此及时更换培养液是一定做的选择之一。我们能做到的是处理该细胞的时候,注意提高相应的冻存量(比如2个长满的T25培养瓶冻存3株作为备用),此外冻存液也要稍微多300ul左右,提高存活率。另一点,根据该细胞的培养条件入手了,该细胞经常使用的培养条件是:RPMI-1640(品牌:中乔新舟 货号:ZQ-200)+10%FBS(品牌:中乔新舟 货号: AU0600)+1%PS(货号:CSP006)+1%L-alanyl-L-glutamine(品牌:中乔新舟  货号:CSP004)+%SP(品牌:中乔新舟  货号:CSP003),建议完全培养基(品牌:中乔新舟 货号:ZQ-221)我们实验室长期的培养发现,该细胞在20%的血清浓度下,生长速度相比较10%有所提升,且此方法也被一些大厂培养机构所使用,对实验时间有要求的小伙伴来说是比较好的一个方法。



图一所示可以看出细胞出现明显聚团严重的现象,遇到这样情况我们该如何培养出图二这么好看的细胞呢?

我们建议针对消化处理和培养器皿的选择两方面来优化,接下来分享一下我们实验室的一些小技巧,帮助大家更好的处理这个细胞。首先这株细胞并不形成一致的单层,而是形成集落,这也是此细胞为何总是出现这个现象的一个原因,因此我们才会想到从细胞消化及培养器皿的处理、选择上去解决这个问题。


在消化处理的时候,我们选用的胰酶浓度是0.25%,弃去上清培养液后,在瓶内添加1ml左右0.25%的胰酶,让它覆盖T25瓶底,迅速吸出丢弃,然后再添加1ml的胰酶,放入到培养箱中消化,此时每2min拿出细胞镜下观察,轻轻拍打瓶底如果多数细胞呈流沙状,然后添加终止液,用巴氏管在瓶底轻轻吹打细胞悬液,目的是把细胞吹散,不要出现团块即可进行下一步的传代或者冻存等操作。


关于器皿的选择,我们实验室前期使用的是Corning的Cellbind培养瓶培养,但后面经过长期的对比培养发现采用我公多聚赖氨酸包被液(货号:0413包被过的T25培养瓶培养的细胞,形态及状态更佳,更不容易出现细胞聚团的现象。


以上就是lncap细胞培养的一些小技巧,大家get到了吗? 


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