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如何养好H9(人胚胎干细胞)?

随着干细胞的医疗前景被大家所熟知,胚胎干细胞也渐渐进入了人们的视野中来了,胚胎干细胞相关研究也日益增多。那么,什么是胚胎干细胞呢?




什么是胚胎干细胞呢


胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESCs,简称ES、EK或ESC细胞)是早期胚胎(原肠胚期之前)或原始性腺中分离出来的一类细胞,它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。无论在体外还是体内环境,ES细胞都能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型--这象征着它具有非好的医疗应用前景,尤其是移植医学。




H9(人胚胎干细胞)的“前世今生”


H9(别名WA09)人胚胎干细胞,1998年由美国干细胞学家詹姆斯·汤姆森博士建立,取自早期胚胎内细胞团。细胞在培养时呈克隆状,贴壁生长。该细胞不需要饲养层细胞支持,用干细胞专用Matrigel基质胶包被培养器皿即可。

虽然H9细胞无需饲养层的特点大大简化了培养过程,但是想培养出一株状态好、分化少的细胞仍然不是件简单的事情。培养所需的试剂及操作规程可在我司官方网站上查询到,下面对其中要点作出归纳:

1:包被用基质胶需采用CORNING/354277 MatrigelhESC-qualified Matrix,该产品没有具体浓度,需要根据说明书上的“稀释因子”进行稀释。一定要在4℃环境中解冻和分装,并且4℃预冷分装器材;

2:培养基需采用STEMCELL mTeSRTM1(货号#85850)套装,分装后保存;

3:复苏细胞时,细胞悬液离心后,要避免弄散细胞团,否则将降低细胞贴壁率和成活率;

4:每次传代及复苏时,在细胞悬液加入培养器皿后需加入ROCK inhibitor Y27632,终浓度为10uM,以期细胞贴壁率及克隆形成率;

5:培养过程中,需要每天换液!

6:如在培养过程中观察到明显的分化细胞集落,及时刮除;

7:当细胞集落变得较大、变得密集和明亮(对比其边缘)而相邻的集落即将融合时,进行传代。细胞集落融合后很容易自发分化;

8:如果传代前观察到细胞分化较多,可在镜下寻找未分化集落并在培养器皿底部标记好,消化后(该过程一定不要超过1Min)用细胞刮刀刮下该区域细胞进行传代培养;

9:细胞冻存时同样要求注意保持细胞团完整。

  下面是一组培养中的优良H9细胞(无饲养层)图片,供您参考:




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