随着人们对于健康的日益重视,生物学成为现时异常热门的科研方向。由于生物学 是一门以观察为主要实验手段的学科,而70%的生物研究以细胞为主要研究对象,因 此能够实现细胞级别观测的显微系统在生物研究中有着大量的应用。根据我国教育部公布的资料,有超30%的科研级显微系统市场被共聚焦显微镜所占领。或以香港科 技大学为例,大学生命科学系已陆续购买超过10台共聚焦显微系统,且由于庞大的 使用需求还在计划购买更多此类产品。这样的市场需求是因为共聚焦显微技术是第 一种可以较高分辨率实现生物样品光学层切(Optical Sectioning)从而实现样品三维。
(3D)结构显微的技术。在生物学研究领域,二维的观测(如普通荧光显微技术, EPI Fluorescent)早已无法满足研究者的需求。三维观测由于可以获取更多更准确的 信息已经逐渐成为标准的研究手段。因此不难理解共聚焦显微镜为何有如此巨大的市场份额。但是共聚焦由于技术的特征,有二项重大缺陷:
(1)由于采用逐点扫描, 共聚焦系统成像速度过慢。仅为大小为20微米以上的细胞成像已需要几分钟甚至几十分钟的时间。
(2)由于将光聚焦在细胞内部,焦点处的光能通常可达正午日光辐 射量的100万倍!因此共聚焦显微镜会在几秒最多几分钟内杀伤被观测的细胞(这一 现象被称为光毒作用)。因此共聚焦显微技术虽然可以观测细胞的三维结构,但是 由于其速度和光毒性的限制,并不可以应用于活体细胞的观测。
为了解决活体细胞三维显微的技术难题,上海中乔新舟代理的新一代Lit Light-Sheet Microscope 使用的线性贝塞尔光页技术并成功将其应用于细胞活体成像。从本质上解决了共聚焦显微技术的种种缺陷。相较于共聚焦显微镜,Lit LBS技 术具有以下突出优势,因此必将取代或部分取代具有庞大市场的共聚焦显微镜。
➢ 光毒性减小超过1000倍,可以用于活体细胞的拍摄;
➢ 成像速度提高超过1000倍,可以高速拍摄活细胞亚细胞结构的动态过程;
➢ 轴向分辨率提高超过2倍,可以以更高的清晰度拍摄细胞内最细微结构的高速动态过程;
应用实例
LiT LBS片层扫描显微镜在对活体样品,尤其是易受光损伤样品的三维高 速动态成像的性能远超其他成像技术。本产品已经被广泛应用于各类生命研 究领域,所观测的样品涵盖了亚细胞结构到小型动物的所有尺度
Hela细胞分裂过程中的染色体 动态过程。蓝色:肌动蛋白; 绿色:细胞质;红色:染色体。
酵母菌细胞中,GFP标记的待研究蛋白(绿色 相对于高尔基体(红色 的运动过程。图像经过 解卷积算法提高了对比 度,LiT LBS 展示了其在 亚细胞器水平成像的能 力。图中所示的结构在 使用共聚焦成像时会被 快速的漂白。
原代培养神经元在受到化学刺激后的动态变化。