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细胞培养基常见问题

胞培养基是人工模拟体内环境以维持细胞体外生长的基础物质,通过提供氨基酸、维生素、碳水化合物及无机盐等必需营养,同时调节渗透压(260-320mOsm/kg)和pH值(7.2-7.4),保障细胞增殖与代谢功能。细胞培养基是细胞培养中不可缺少的营养成分,但是最基础的培养基却给很多实验者带来了一系列的问题。如果细胞状态不好,后续试验将无法进行,甚至前功尽弃。

培养基常见问题

一、如何选用培养基? 选择培养基没有一定标准,有几点建议可供参考:

1. 建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。可以查阅文献,或在购买细胞株时咨询。

2. 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选1640;进行细胞杂交、基因转移实验,可选择IMDM

3. 用多种培养基培养目的细胞,观察其生长状态,可以用生长曲线、集落形成率等指标判断,根据实验结果选择最佳培养基,这是最客观的方法,但比较繁琐。

4.ATCCAmerican Type Culture Collection)收集了绝大多数细胞的详细资料。打开ATCC网页的Cells and hybridomas链接,输入细胞名称就可以搜索ATCC的细胞数据库。数据库中有每一种细胞的详细描述,包括细胞的来源,培养和冻存条件,以及相关文献等资料。

二、液体培养基可以放-20℃保存吗

不可以!因为在-20℃下,培养基中的盐容易析出,培养基融化后,有的盐可能无法重新溶解,从而导致培养基渗透压降低,培养细胞时,细胞容易破裂而死亡, -20℃下培养基中某些成分可能会被破坏,特别是完全培养基中的因子不可反复冻融,其活力会大大降低甚至失活。

三、新配制的液体培养基能保存多久?

我们建议将新配制的培养基放置于4℃,避光保存尽量在一周内使用完毕。培养基越新鲜越好。

四、培养基中添加了血清和抗生素后,可长期保存吗?

一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

五、培养基中是否须添加抗生素?

除了特殊筛选系统外,一般正常培养状态下,培养基中不应添加任何抗生素。

为防止细菌、真菌污染,可以加入青霉素-链霉素双抗溶液,其培养基中的终浓度为青霉素100U/ml,链霉素为100ug/ml。

产品:CSP006

六、为何培养基保存于4℃冰箱中,颜色会偏暗红色,且pH值越来越偏碱性?

培养基保存于4℃冰箱中, 培养基内之CO2 会逐渐溢出,造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂(通常为phenol red) 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱的结果, 将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时, 可以通入无菌过滤之CO2 以调整pH 值。如下图所示:

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