随着细胞培养技术的不断发展和普及，细胞培养已经成为细胞学、遗传学、免疫学、实验医学和肿瘤学等多种学科研究的重要工具。然而，要进行一次成功的细胞培养并不是件轻松简单的事情。

要想在一次细胞培养过程中获得足量且优质的培养物，通常要做到以下几点：活力好且无污染的种子细胞；适合该细胞生长的完全培养基；安全无污染的试剂耗材；严格的无菌操作；完备的细胞培养知识体系。在这几点当中，有些小的细节往往容易被忽视，快来看看你是否中过招吧！

1.及时保种—未雨绸缪，有备无患：就算是细胞培养经验再丰富，细胞房条件再好，也无法100%避免微生物污染。一旦培养物发生污染，将会很难补救。所以，在拿到种子细胞后，及时“备份”不失为一种明智之举。具体做法是：如果拿到的是一瓶密度合适的活细胞（以T25培养瓶为例）--第一次传代时，一半细胞直接冻存一支保种，剩下一半细胞接种至一个（或多个，比例视细胞增殖速度、细胞类型而定）新的培养瓶；如果拿到的是冻存管--先复苏至一个培养瓶，待细胞长到传代密度后，按上面活细胞处理方法保种。这样一来，可以大大减少培养物还未大量扩增就被污染或状态差导致无种子可用的尴尬境地啦！

2.PBS的选用：传代之前需要用PBS洗去残留培养基是因为其中的Ca+、Mg+会降低胰蛋白酶活性。所以，一定要使用DPBS或者不含Ca+、Mg+的PBS哦！否则可能会出现消化时间变长、消化不完全甚至消化不下来细胞的情况。

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PBS磷酸盐缓冲液

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3.消化时间的把握：说明书上的消化时间仅供参考，不要完全遵循说明书上的消化时间，因为消化时间和细胞密度、胰酶效价甚至细胞状态有关。要边消化边在显微镜下观察（期间不要频繁晃动培养瓶），把握最佳的消化时间是细胞培养中的重中之重！

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4.消化终止液的选用：一般使用2倍胰酶体积的完全培养基或者等体积大豆胰蛋白酶抑制剂来终止胰酶消化作用，但在使用完全培养基终止时要注意必须确认该完全培养基含有10%FBS。如果该细胞采用无血清培养基培养，要使用等体积大豆胰蛋白酶抑制剂来终止消化。

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5.培养基的小细节：培养基能否用来培养你的细胞的关注点除了配方是否合适、是否在保质期内、有无微生物污染以外，还需关注培养基PH值--最直观的方法是看培养基是否变成紫红色。如果培养基是紫红色，说明此时PH偏高，呈碱性。很多细胞对PH值较为敏感（如BV-2，THP-1），偏碱可能导致细胞状态差甚至凋亡。为了避免出现这种情况，可在接种细胞前将适量培养基装入培养瓶，然后放入CO2培养箱静置20Min以调整PH（非透气瓶要拧松瓶口）。可以这么做的原因是因为绝大多数培养基（L-15培养基除外）都具PH缓冲系统。

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6.经常铺不匀细胞怎么办：一般使用“十字法”摇匀细胞，但如果把握不好力度和摇晃次数的话很可能无法铺匀细胞，为自己的实验或下次传代带来不必要的麻烦。解决办法是：将细胞悬液加入培养瓶后立起培养瓶轻轻吹打培养基2-3次后立即平放入培养箱，在细胞贴壁前不再搬动培养瓶。