SD大鼠骨髓间充质干细胞简单介绍：

  骨髓原始间充质干细胞(SD大鼠骨髓间充质干细胞)是骨髓基质干细胞，是人们在哺乳动物的骨髓基质中发现的一种具有分化形成骨、软骨、脂肪、神经及成肌细胞的多种分化潜能的细胞亚群。它们对骨髓中的造血干细胞（HSC）不仅有机械支持作用，还能分泌多种生长因子（如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等）来支持造血。

常用的分离MSC的方法主要有全骨髓法和密度梯度离心法，(SD大鼠骨髓间充质干细胞)全骨髓法即根据干细胞在低血清培养基中有贴壁优势特性，定期换液除去不贴壁细胞，从而达到纯化及扩增MSC的目的。密度梯度离心法即根据骨髓中各细胞成分比重的不同，分离单核细胞进行贴壁培养。二者本质上无多大区别。随着对MSC表面抗原认识的深入，又有人利用免疫方法如流式细胞仪法、免疫磁珠法等对其进行分离纯化。但经过流式或磁珠分选后的细胞出现了增殖缓慢等一些问题，加之成本较高和技术的难度，在某种程度上限制了这些方法的广泛应用。

常见分离方法

目前BMSCs的分离方法主要有:

✦ 贴壁分离法：根据BMSCs的粘附特性来实现分离贴壁的方法；

✦ 密度梯度离心法：根据BMSCs与其他细胞的密度不同来分离的方法；

✦ 流式细胞仪分离法：根据细胞大小或者根据细胞表面的一些特殊标志来分离的方法。

密度梯度离心法与流失细胞仪分离法价格昂贵且操作复杂、容易导致细胞大量流失，应用相对较少。贴壁培养法应用很早，具有操作简单，对细胞干扰少，不易发生污染等特点较为广泛应用，其缺点是细胞纯度较低，但有关研究表明，BMSCs细胞扩增到P1、P2代后细胞的纯度分别可达到95%、98%。

大鼠骨髓间充质干细胞细胞传代能力测试 

批次323363

大鼠骨髓间充质干细胞生长快速，高密度会影响细胞干性，建议按照1:3比例传代细胞，传代建议使用胰酶浓度为0.05%进行消化。消化每t25培养瓶加胰酶1ml。消化时间约1-2min内，t25培养瓶培养液约7ml完全培养基。

本次验证：传代图如下（4X）

P1-P5代，按照1:3比例传代，48H(隔天)传代一次。每次细胞状态和增殖能力均良好。

P6-p8代1:3传代，72h（隔两天）传代一次。

P8-P10代1:3传代，144h（隔6三天）传代一次。

此时细胞个体变大，生长速度明显减慢。

SD大鼠骨髓间质干细胞质检报告

货号：ZQ0277

细胞形态图：

细胞处于快速分裂的状态，良好的MSCs显示较小的纺锤状的形态，伴有较多的折光的双联体，为新的正在分裂的细胞。细胞首代状态较好，多数呈长梭形生长，部分不规则，阳性良好，经传代 5次后，细胞仍较有活力。以1:2 的分种率传代，约48h可长满。

分化测试

2.成骨诱导分化

细胞汇合度约达 70%时，加入间质干细胞成骨诱导液，诱导 21 天可见钙结质，进行茜素红染色鉴定， 茜素红与类骨质结合，形成同心圆状的深红色小结节。

茜素红S染色试剂盒描述：

茜素红S （Alizarin Red S,简称ARS ）作为一种染料型配位剂在分光光度分析方面已有了广泛的应用。近年来，很多作者把 ARS 及其金属配位物在汞电极上的吸附催化波用于电分析中，提高了测定的灵敏度和选择性。货号：0223，可点击官网咨询查看哦！

3.成软骨细胞分化

细胞汇合度约达 70%时，加入间质干细胞成骨诱导液诱导 21 d 后，使用甲苯胺蓝染色可见较广泛的细胞外基质蓝紫色，尤其在细胞堆积区，图中为细胞密度稍低的区域也可见明显的异染颗粒。

阿利新蓝染色试剂盒描述：

  阿尔辛蓝是一种用于检测细胞软骨形成的染料，它可以染色软骨组织中的硫酸化蛋白多糖。阿尔辛蓝染色试剂盒含有1%的阿尔辛蓝溶液，0.1%的核固红，方便，即用型溶液。在pH 2.5时，阿尔辛蓝染色酸性粘多糖并显示蓝色，而核固红染色核粉红色至红色，细胞质淡粉红色。货号：8378，可点击官网咨询查看哦！

 表面分子流式检测

CD29:来源  THermoFisher      PE

CD90:来源  THermoFisher      PE

CD45:来源  THermoFisher     FITC