1、常用的血清种类以及其作用？

细胞培养中血清的作用是保证细胞能够顺利生长和增殖。血清中含有多种不同的蛋白质、氨基酸、激素等，其中有些细胞本身不能合成，血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质,能促进细胞的生长、增殖和贴附，同时还具有抗胰酶活性。常用于细胞培养的血清主要是牛血清和马血清，牛血清中小牛血清、胎牛血清、新生牛血清的应用广泛。

附：牛血清的区分：

2、为什么血清在解冻后会出现絮状沉淀？应该怎样处理？

血清中絮状沉淀产生的原因有很多，其中普遍的还是由于血清中脂蛋白的变性所致，而血纤维蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解冻后，也会存在于血清中，这也是造成沉淀的主要原因，但这些絮状沉淀并不影响血清本身的质量。欲去除沉淀，可采取自然沉降法或者将血清分装于无菌离心管中，2000～3000rpm离心5min。一般不建议用过滤的方法去除絮状沉淀，因为沉淀会阻塞滤膜，造成过滤困难或无法过滤。

3、L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？ 
   重要，谷氨酰胺是细胞生长的氨基酸，具有重要的免疫调节作用，它是淋巴细胞分泌、增殖及其功能维持所需要的，同时也是细胞合成核酸和蛋白质的重要原材料，可促使淋巴细胞、巨噬细胞的有丝分裂和分化增殖，增加细胞因子TNF、IL-1等的产生和磷脂的mRNA合成。谷氨酰胺作为核酸碱基从头合成的途径的重要原料，如果缺失就会造成细胞合成DNA效率下降，造成细胞分裂减少，压制细胞增殖，导致细胞生长不良甚至死亡。因此在配制多数细胞培养液时都需补加一定量的谷氨酰胺。由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，L-谷氨酰胺在溶液中不稳定（在4℃培养溶液中半衰期为3个星期，37℃中为1个星期）使用中要单独配制，置-20℃冰箱中保存，用前加入培养液中，另外L-谷氨酰胺的降解会导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。

4、GlutaMAX-I是什么？稳定程度如何？

  GlutaMAX-I 二肽是L-谷氨酰胺的衍生物，将其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护，具有更好的稳定性。细胞中的肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。 GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I 二肽溶液有很小的降解，如果在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。

5、放置在冰箱中的培养基颜色会发生变化，为什么？

培养基保存于4℃冰箱中，培养基内CO2会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中酸碱指示剂(通常为phenolred)的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱后再用于细胞培养将造成细胞生长停滞或死亡。

6、细胞培养基的配制和储存应该注意什么？

细胞培养基配好后，要先抽取少许放入培养瓶内在37℃培养箱内空陪养24~48h，已检测培养液是否有污染，然后方可用于实验。配置培养基所需的血清要合格并且保持稳定。每次配液量以使用两周左右的量为宜，一次配液不要太多，一是短期内用不完造成营养成分损失需要补充，二是量大易造成污染。

7、培养基中丙酮酸钠的作用是什么？

丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞就会选择丙酮酸钠作为代谢底物。丙酮酸钠是糖酵解途径中的中间产物，也是糖酵解途径的首步，所以培养基中的丙酮酸钠即可以作为能量的来源，也可以为细胞的代谢提供碳骨架。

细胞培养基中常用的添加物及其作用？

（1）非必要氨基酸溶液（Non-Essential Amino Acids, NEAA）

非必要氨基酸溶液包括L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-天（门）冬酰胺、L-天（门）冬氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸和甘氨酸7种非必要氨基酸，能有效改善细胞培养基配比，降低细胞培养时细胞自身生产非必要氨基酸的副作用，促进细胞增殖代谢，是细胞培养中常用的添加剂之一。

（2）表皮细胞生长因子（Epidermal Growth Factor）

EGF是人体内分泌的一种重要细胞生长因子，有很强的生理活性。它的主要功能是促进皮肤细胞的分裂。研究表明：微量的EGF能强烈刺激细胞生长，压制衰老基因表达，它还能刺激细胞外的一些大分子（如透明质酸和胶原蛋白等）的合成与分泌。

（3）氢化可的松

氢化可的松，又称皮质醇，是从肾上腺皮质中提取出的是对糖类代谢具有很强作用的肾上腺皮质激素，即属于糖皮质激素的一种。氢化可的松及其他糖皮质激素能提高细胞对有害刺激的应激能力，减轻细菌内毒素对细胞的损害。除此之外，氢化可的松可促进糖原异生、减慢葡萄糖分解、提高蛋白质的分解代谢，大剂量使用会压制蛋白质合成。

（4）胰岛素

胰岛素可以降低蛋白降解；降低脂肪降解；增加氨基酸的摄入；保持细胞的活性。胰岛素控制着蛋白质、糖、脂肪三大营养物质的代谢和贮存。而且胰岛素可促进钾离子和镁离子穿过细胞膜进入细胞内，可促进脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)及三磷酸腺苷(ATP)的合成。胰岛素作用的靶细胞主要有肝细胞、脂肪细胞、肌肉细胞、血细胞、肺脏和肾脏的细胞、睾丸细胞等。

（5）β-巯基乙醇

β-巯基乙醇，又称巯基乙醇β-Mer，在某些细胞生长分裂的过程中，会向培养基中释放氧自由基。氧自由基积累到一定程度的时候，会破坏细胞膜和细胞器膜，从而杀死细胞。β-巯基乙醇作为一种强还原剂，可以中和掉细胞培养基中积累的氧自由基，这样可以使得细胞分裂到很高的密度而不死亡，从而便于进行细胞增殖实验。β-巯基乙醇的活性部分是硫氢基，其中一个重要作用是使血清中含硫的化合物还原成谷胱甘肽，能诱导细胞的增殖，为非特异性的激活作用。同时避免过氧化物对培养细胞的损害。