RAW264.7细胞作为一种经典的小鼠巨噬细胞系，因其易于培养和操作而成为科研工作者的得力助手。然而，RAW264.7细胞在培养过程中容易发生分化，导致细胞形态改变、功能下降，甚至影响实验结果的可靠性。如何让RAW264.7细胞“长得更漂亮”，保持其原始的形态和功能？今天，我们将为您揭秘RAW264.7细胞培养的黄金法则，助您轻松驾驭这一细胞系！

细胞信息

l 倍增时间：11-30 hours，（生长快速，消耗营养快速，T25瓶建议添加7ml完全培养基，次日进行观察生长速度）。

l 传代比例：1:4-6

l 培养体系：DMEM高糖（品牌：中乔新舟 货号：ZQ-100）+10%胎牛血清（中乔新舟 货号：ZQ0500）+1%双抗（中乔新舟   货号：CSP006）

l 细胞形态：该株巨噬细胞形态上包含松散贴壁的纺锤形和圆形或者立方形的细胞。当细胞密度较大时，细胞会轻微脱落变圆或者许多细胞堆在一起，有些细胞甚至脱落漂浮，这些漂浮的细胞是活的，在传代时应收集起来离心，细胞沉淀可以继续培养。

l 换液频率：2~3次/周

正确传代方法一

正确的传代方法是 RAW 264.7 细胞培养的关键，每一步操作都要细致入微，稍有不慎细胞就分化了。RAW 264.7 细胞不能用胰酶消化，胰酶消化传代反而更容易分化。我司培养 RAW 264.7 细胞是十余年，摸索出一个刮刀传代的方法，此方法操作简单，能更好地控制细胞分化率。为了更加直观学习传代步骤，我们用视频进行讲解，方便大家更好把控传代步骤：

出入视频

正确传代方法二

当您没有准备刮刀时，我司建议您按照以下操作步骤进行传代，减少细胞的分化。

l 细胞密度达到80%。用手掌心拍打瓶尾部，观察细胞脱落情况。

l 拍打过程中有50-80%的细胞会脱落。此时收集脱落细胞。

l 按照1：4-6的比例传代，并补充新鲜完全培养基。T25瓶7ml完全培养基。

l （切记用枪头吹打或巴氏吸管吹打，由于每个人吹打力度不同，吹打次数不同，传代3-5次后会造成很多不可控因素导致细胞分化）。

l 以下是我司客户拍打传代图：

                （客户按照1：4-6比例传代，第二天提供20X细胞状态图。

T25培养瓶活细胞RAW264.7到货培养须知：

l 放入培养箱静止2-4h后观察细胞贴壁情况，并进行拍照。

l 若少量漂浮细胞，需要离心1200转5分钟收集细胞，贴壁细胞根据视频步骤进行传代处理，无刮刀根据“方法二”进行处理。

l 若对传代密度把控不了和操作步骤还是不了解，可当天联系我司销售人员/区域代理或者我司技术人员。

培养注意事项

l 该细胞传代时不需要用胰酶消化。传代时，用无菌细胞刮刮拭培养表面将细胞刮落，收集离心后重悬接种到新的培养瓶中。

l 该细胞形态上包含松散贴壁的纺锤形和圆形或者立方形。当细胞密度较大时，细胞会轻微脱落变圆或者许多细胞堆积在一起，有些细胞甚至脱落漂浮。这些漂浮的细胞是存活的，在传代时应收集起来，离心后细胞沉淀可以继续培养。细胞生长密度越大时，巨噬细胞（圆细胞）就会越多。

l 细胞对血清质量非常敏感，可能引起细胞贴壁能力变化或者细胞分化，应选用高质量的胎牛血清。

l 培养条件、运输、环境变化等因素会影响此细胞的状态，因此收到细胞后需要调整一段时间，请耐心培养。

l 强烈推荐使用本公司对应的培养基，减少细胞培养过程的变因。

一、 RAW264.7冻存管复苏步骤：

l 从液氮中取出冻存的raw26.4细胞，迅速放入37℃水浴中解冻。(或用干冰盒转移到实验室)

l 将细胞悬液转移至含预温培养基的离心管中，轻轻混匀。(15ML离心管3ml)

l 以1000 rpm离心5分钟，弃上清，用新鲜培养基重悬细胞。（T25添加7ml）

l 将细胞接种于培养皿中，置于37℃、5% CO₂的培养箱中培养。

l 以下图片是我司客户收到冻存管复苏24h后状态图。

复苏24h后raw264.7细胞图,中乔新舟客户提供，可进行传代。

复苏24h后raw264.7细胞图,中乔新舟客户提供手机拍摄，可进行传代。